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    11选五开奖结果:M1和M2型巨噬细胞表型的比较分析_图文

    北京十一选五开奖结果 www.frdg.net 《现代免疫学》2008年第28卷第3期

    M 1和M2型巨噬细胞表型的比较分析
    李 康,郭 强,王翠妮,陈 敏,徐 薇4,熊思东 (复旦大学免疫生物学研究所,复旦大学上海医学院免疫学系上海200032)

    摘要:通过对M1和M2型巨噬细胞表型相关指标的比较分析。评价各鉴定巨噬细胞类型的表型指标及其意义。按常规方

    法以IFN一7及LPS将骨髓来源巨噬细胞诱导成M1型巨噬细胞,以II.-4诱导出M2型巨噬细胞。分别以RT-PCR和酶活性

    定量方法检测精氨酸代谢相关酶的表达和活性;以ELISA检测IL-12和IL一10的分泌;以FACS检测巨噬细胞膜分子的表

    达。结果显示:M1型巨噬细胞诱导性一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNoS)表达和活性水平较未刺激组明显

    升高,IL一12产生显著增加,CDl6/32表达上调;而M2型巨噬细胞I型精氨酸酶(arginase 1,Arg一1)的表达水平和酶活性

    较未刺激巨噬细胞显著提高,IL-10分泌轻度增加。并且表达高水平的CD206和DECTIN一1。表型比较分析结果表明,iN—

    os表达和活性、II。一12的分泌和膜蛋白CDl6/32可用于鉴定M1型巨噬细胞,而Arg一1、CD206和DECTIN一1是鉴定M2

    型巨噬细胞较为理想的表型指标。

    关键词:M1型巨噬细胞;M2型巨噬细胞;表型分析

    中图分类号:R392.12

    文献标识码:A

    文章编号:1001—2478(2008)03—0177-07

    巨噬细胞作为一种具有可塑性和多能性的细胞 群体,在体内外不同的微环境影响下,表现出明显 的功能差异[1’2]。目前根据活化状态和发挥功能的 不同,巨噬细胞主要可分为M1型即经典活化的巨 噬细胞(classically activated macrophage),和M2 型即替代性活化的巨噬细胞(alternatively activated macrophage)[3“]。在体外培养条件下,通过IFN一7 及脂多糖(1ipopolysaccharides,I。PS)诱导产生M1 型巨噬细胞和通过Th2型细胞因子(如II。-4、IL- 13等)诱导产生M2型巨噬细胞,具有与体内极化 的巨噬细胞相似的表型和功能,已成为研究巨噬细 胞异质性的重要手段。
    在机体不同生理和疾病状态下,巨噬细胞表现 出不同的类型,通过表型分析鉴定巨噬细胞类型已 成为研究巨噬细胞功能多样性的主要方法。已有文 献主要从精氨酸代谢途径[5一]、细胞因子分泌[7’8] 和表面分子的表达[9’10]等方面区分M1型与M2型 巨噬细胞。然而,到目前为止,关于M1和M2型 巨噬细胞的表型特征尚未统一。为了评价各种表型
    收稿日期:2008—02—15 基金项目:国家自然科学基金资助项目(30772020)I上海市医学领 军人才基金资助项目(LJ06011) 作者简介:李康(1983一),男,硕士,主要从事巨噬细胞免疫调 节方面的研究。 通讯作者:熊思东(E-mail:sdxiongfd@126.corn)}’共同通讯作者

    指标及其意义,我们参照公认的经典的方法在体外 诱导了MI型和M2型巨噬细胞,对MI和M2表 型相关指标进行检测,进而相对量化地比较各表型 指标,以期为体内外鉴定巨噬细胞类型时表型指标 的选择提供实验依据。
    1材料与方法
    1.1 材料 1.1.1 实验动物 C57BL/6小鼠(H一26、4~6周 龄,雌性),体重16~20 g,购自上海斯莱克实验 动物有限公司。清洁级饲养于复旦大学实验动物科 学部。 1.1.2 主要试剂 细胞培养基RPMI 1640(Gibco BRL公司),小牛血清(Gibco BRI,公司),I.-谷氨 酰胺(L—Glutamine)(政翔化学试剂研究所),双抗 (氨卞青霉素钠、硫酸链霉素)(上海第四制药厂), 胰酶(华美生物工程公司);小鼠重组IFN一7(Pep- rotech公司),LPS(Sigma公司),小鼠重组IL一4 (Peprotech公司);Taq DNA多聚酶、dNTP等 PCR试剂(Biostar公司),TRIzol(北京鼎国生物公 司),DEPC(Genetimes公司)。M—MuLV Reverse Transcriptase(MBI公司);a一异亚硝基苯丙酮(a— isonitrosopropiophenone)(Sigma公司), Arginine (鼎国生物技术有限责任公司),NO检测试剂盒 (Cayman公司);小鼠IL-10 ELISA检测试剂盒

     万方数据

    《现代免疫学))2008年第28卷第3期

    (eBioscience公司),小鼠IL-12 ELISA检测试剂 盒(eBioscience公司);FITC标记的大鼠抗小鼠 F4/80抗体(CALTAG Laboratories公司),PE标 记的驴抗大鼠IgG(H+I。)抗体(eBioscience公 司),PE标记的抗小鼠CDl6/32(FcTIII/FcTII受 体,2.4G2)抗体(BD Pharmingen公司),未标记 大鼠抗小鼠CD206抗体(Serotec公司),未标记大

    鼠抗小鼠MGI??固逵珊衫迹牛颍幔螅恚酰笠窖е行模校椤?eter Leenen教授惠赠,未标记大鼠抗小鼠DEC- TIN一1抗体由南非Cape Town大学Gordon Brown 教授惠赠。 1.1.3 引物 由北京赛百盛公司合成,本实验所 用引物见表l。

    表1引物序列

    I.2 方法 1.2.1 骨髓来源巨噬细胞的诱导 改进的Vats 等r1¨的方法,将小鼠颈椎脱臼处死后,无菌分离 股骨和胫骨,用无菌2.5 m1注射器吸入L929条件 培养基(含有20%小鼠成纤维细胞株L929培养3 d 的上清、20%小牛血清、100 U/ml青霉素、100 mg/ml链霉素和2 mmol/L谷氨酰胺的DMEM培 养液),吹下骨髓内容物入一无菌平皿,并将细胞 充分吹匀,在L929条件培养基中培养,7 d后去 除非贴壁细胞,再培养于完全RPMI 1640培养基 (含10%小牛血清、1 000 U/ml青霉素、100 mg/ ml链霉素和2 mmol/l。谷氨酰胺)中,1 d后收集 的贴壁细胞即为骨髓来源的巨噬细胞。 1.2.2 巨噬细胞的体外刺激 以0.25%胰蛋白酶 消化收集诱导成熟的巨噬细胞,根据各实验要求铺 于24孔或6孑L细胞培养板中,参照Vats等E11]的 方法,以IFN一7(100 U/m1)和LPS(5 ng/m1)共同 刺激培养24~96 h,诱导出M1型巨噬细胞;参照 Odegaard等no]的方法,以IL-4(10 ng/m1)刺激 培养24~96 h诱导出M2型巨噬细胞。 1.2.3 总RNA抽提及RT—PCR 提取方法参照 试剂盒说明书进行,向刺激24 h的细胞(约1× 106)中加入1 000肚l TRhol,立即用1 ml注射器 抽打5次;然后加入200“l氯仿,混匀,室温静 置15 rain后12 000×g高速低温离心20 rain;小 心将上层水相移至1.5 ml离心管中加入500“l异 丙醇,振荡混匀。一20℃放置30 min沉淀RNA, 12 000×g高速低温离心10 rain;小心弃去上清,
     万方数据

    再在离心管中加入1 ml 75%乙醇,振荡片刻,8 000×g低温离心5 min;小心弃去上清,室温静置 5~10 min使RNA沉淀恰好干燥,加水溶解。将 TRIzol抽提的细胞总RNA,以逆转录进行cDNA
    第一链的合成:1~5弘g总RNA中加1 pl Oligo (dT)”70℃5 min,于冰上加入5×缓冲液3 弘l,dNTP 2肛l,RNasin 0.5 tA,逆转录酶200 U,加水至总体积15“l,42℃延伸60 rain后,70 ℃10 rain。然后以cDNA为模板扩增iNOS和Arg- 1的基因编码片段,以鼠GAPDH为内参照,扩增 条件如下:94℃预变性5 min;94℃变性30 S, 59℃退火30 8,72℃延伸30 S,30个循环;72℃ 延伸10min。 1.2.4 iNOS活性测定 收集刺激后24 h的培养 上清,按照NO检i贝0试剂盒(硝酸还原酶法)操作说 明,?。玻埃?p.1培养上清,加入100肚1 Griess Rea— gent R1,再加入等体积Griess Reagent R2,混匀 室温静置10 rain,于540 nm处检测各样品吸光度 (D值),以亚硝酸钠(NaNO:)建立标准曲线。 1.2.5 Arg一1活性测定 参照Lumeng等181的方 法,以100 tA 0.1%Triton X—100裂解刺激48 h 后的细胞,加入100“l 50 mmol/L Tris—HCI和10 mmol/L MnCl2,56℃温育10 rain,加入100 ul 0.5 mol/L Arginine,37℃温育30 rain,加入800 弘l H:SO。/H。PO。终止。随后加入50肛l 9%a一异亚 硝基苯丙酮(a—isonitrosopropiophenone),95℃温 育30 rain;540 nm波长检测吸光度(D值),以尿 素(Urea)建立标准曲线。

    M1和M2型巨噬细胞表型的比较分析

    1.2.6 ELISA检测细胞因子分泌 分别收集刺激 后24 h(IL-12)和48 h(IL一10)的培养上清。按照试 剂盒说明操作,1:250稀释包被抗体200弘l,4℃ 包被过夜,洗板3次,加入培养上清100 pl,室温 孵育1 h后洗板3次,加入1:250稀释的生物素 标记检测抗体100“l,室温孵育1 h后洗板3次, 加入l:200亲和素标记辣根过氧化物酶100扯1,室 温孵育30 rain后洗板7次,加入底物液100 td, 室温避光15 rain后加入2 mol/L H2 SO。终止, 450 nm波长检测吸光度(D值)。 1.2.7 流式细胞术检测细胞膜蛋白表达 按上述 方法诱导培养7 d的骨髓细胞或刺激后的细胞,胰 酶消化计数,5×105/管,PBS洗1次,100肚l PBS重悬,加入1弘g FITC标记的大鼠抗小鼠F4/ 80抗体和1肚g PE标记的抗小鼠CDl 6/32抗体,4 ℃共育30 rain,用PBS洗去游离的抗体,用0.3 ml PBS重悬后,用流式细胞仪FACSCalibur(BD 公司)检测细胞表面F4/80和CDl6/32的表达。 CD206、MGL和DECTIN—l采用间接免疫荧光染 色方法,?。怠粒保埃荡碳ず蟮木奘上赴?,PBS洗1 次,100肛1 PBS重悬,分别加入0.5肛g未标记的 大鼠抗小鼠CD206抗体、1弘g未标记的大鼠抗小 鼠MGL抗体或0.5扯g未标记的大鼠抗小鼠DEC— TIN一1抗体,4℃共育30 rain,用PBS洗去游离的 抗体,100弘l PBS重悬后,加入0.25弘g PE标记 的驴抗大鼠IgG(H+I。)抗体,4℃共育30 min, 用PBS洗2次,用0.3 ml PBS重悬后用流式细胞 仪FACSCalibur检测。根据实验组抗体的荧光标 记,分别选择FITC标记和PE标记的抗小鼠 IgG2b同型抗体作为阴性对照,未与抗体作用的巨 噬细胞作为空白对照。 1.3统计学分析采用GraphPad Prism 4.0软件 或SPSSll.5软件对数据进行统计分析,两组问差 异比较采用Student’S t检验,多组间差异比较采 用单因素方差分析,尸<0.05视为差异具有显著 性,Pd0.01视为差异具有显著性。
    2 结果
    2.1 原代巨噬细胞的诱导和鉴定 首先在体外诱 导骨髓细胞分化成熟为巨噬细胞。采集骨髓细胞, 利用小鼠成纤维细胞系L929自发分泌单核巨噬细 胞定向分化所需的巨噬细胞集落刺激囚子(macro— phage-colony stimulating factor,M—CSF),加入

    L929培养上清培养7 d后,发现诱导分化的巨噬 细胞的纯度高达92%,适用于后续实验(图1)。
    F4/80 图1骨髓来源巨噬细胞F4/80的表达
    2.2 M1和M2型巨噬细胞精氨酸代谢关键酶表达 和活性的变化 在体外培养条件下,参照经典方法 以IFN一7及I。PS将骨髓来源巨噬细胞诱导成M1 型巨噬细胞,以IL一4诱导将其诱导成M2型巨噬 细胞n“11]。不同类型巨噬细胞的功能差异与精氨 酸代射有关,两种代谢途径关键酶iNOS和Arg—l 相互竞争,分别介导抗感染和损伤修复的功能。因 此首先通过RT—PCR研究了iNOS和Arg-1的表达 水平,而后通过二者的活性功能来评价M1和M2 型巨噬细胞。结果发现:M1型巨噬细胞iNOS的 表达(图2A)和活性(图2B)较未刺激M0型巨噬细 胞显著增加(P<o.01),而M2型巨噬细胞高表达 Arg-1(图2A)且酶活性(图2B)显著升高(P<
    0.01)。
    2.3 M1和M2型巨噬细胞细胞因子分泌水平的检 测M1和M2型巨噬细胞可通过分泌不同细胞因 子,发挥免疫调节的作用,其中IL-12和IL一10分 别介导了正向和负向凋节功能,因此我们检测了巨 噬细胞这两种细胞因子的分泌水平,结果如图3所 示,IFN一7和LPS刺激巨噬细胞分化为M1后其 IL一12水平显著上升,其IL一10的分泌略有增加(P >o.05);II。一4使巨噬细胞分化为M2后其1L—lo 分泌水平明显增加(P<0.05),而II.-12水平很 低。 2.4 M1和M2型巨噬细胞表面分子表达的检测 巨噬细胞膜蛋白表达的差异是鉴定不同类型巨噬细 胞的重要方法。我们也对已报道M1型巨噬细胞的 标志CDl6/32(FcTIII/Fc7II receptor)和M2型巨

     万方数据

    ·180·

    噬细胞的标志CD206(mannose receptor)、MGI。 (macrophage lectin specific for galactose/N—acetyl—

    galactosamine)、DECTI N一1(B—glucan receptor)
    的表达进行了FACS检测(图4A)。在IFN一丫和 LPS刺激下,巨噬细胞表面CDl6/32的阳性率未 见明显改变,但平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)较M0型巨噬细胞明显增加(P< 0.01)(图4C),CD206、MGL和DECTIN一1的阳

    性率和CD206的平均荧光强度较M0都略有增 加,但没有统计学意义(P>0.05)(图4B和C); 在IL一4刺激分化为M2后,CDl6/32阳性率和平 均荧光强度均无显著改变(P>0.05)(图4C),而

    CD206和DECTIN一1表达阳性率较M0显著增多 (P<o.01)(图4B),其中DECTIN一1平均荧光强 度明显上升(P<O.01),(图4C);MGL的阳性率 和平均荧光强度均未见明显变化。


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    图2 M1和M2型巨噬细胞精氨酸代谢关键酶表达和活性的差异 A.基因表达水平;B.酶活性水平(1.未刺激组;2.1FN一丫+ LPS;3.II.-4)(’P<20.01、?!迹埃埃担?br />
    《现代免疫学》2008年第28卷第3期


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    ——一IL一12 r--'n IL一10

    350 300 250台

    200甚
    150 2

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    0 3

    图3 M1和M2型巨噬细胞细胞因子分泌水平的变化 1.未刺激组;2.IF忖7+LPS,3.1I;4(’Pd0.05;~Pd0.01)

    2.5 M1和M2型巨噬细胞表型的比较分析我们 对M1和M2型巨噬细胞表型指标量化后进行了比 较分析,以评价这些表型指标及其意义。结果如表 2所示。精氨酸代谢相关酶在表达和活性水平都能 较好的区分M1和M2型巨噬细胞;IL一12的高分 泌只见于M1型巨噬细胞,而IL一10分泌在两种巨 噬细胞中的差异不明显;CDl6/32在M1型巨噬细 胞中的表达要显著高于M2,M2与MI型巨噬细 胞相比,CD206和DECTIN一1表达明显上调。以 上结果提示:IL一12的分泌、iNOS表达和活性以 及膜蛋白CDl6/32的表达可用于鉴定M1型巨噬 细胞;Arg一1表达和活性、CD206以及DECTIN一1 的表达,可用于鉴定M2型巨噬细胞。

    表2 M1和M2型巨噬细胞表型的比较分析’

    表型

    指标

    M1

    M2

    IL—12

    蛋白分泌

    十十+



    iNoS基因表达

    l}



    酶活性

    .4-+ :

    +/一

    CDl6/32

    平均荧光强度 陬毽晕

    +十

    +{-

    +/一 七j-

    MGL

    阳性率

    +/一

    +/一

    II,10

    平均荧光强度 蛋白分泌


    +/一

    +/一 +

    CD206

    平均荧光强度

    +/~



    阳性率

    +/一

    uI++ !

    Arg一1

    基冈表达 酶活性

    +/~


    十十 、
    j ·}_卜 ?

    DECTIN一1

    平均荧光强度

    +/-

    十+

    阳性率

    +/~

    ++++

    ____________________o·__-__-_·____-_____-_______’-____·-______’_________·___’_-·__________’___·_-_-_●●o_’·-__-__-一i ii。

    ’削断标准:根据M1型和M2型巨噬细胞表型指标的测定值与

    M0型巨噬细胞(未刺激巨噬细胞)测定值的比值Ratio(R),“一”表

    示R<1;“+/一”表示1≥R<2;“+”表示2-%R<5;“+十”表示5

    ≤R<10;“q-++”表示R≥10;阴影表示该表型指标在Ml型与

    M2犁巨噬细胞间差异具有显著性(P<O.01)

     万方数据

    M1和M2型巨噬细胞表型的比较分析



    未刺激组LPS+IFN-Y

    IL_-4





    一,孰 N 。孰 l誊



    盒 8









    鲁 宥

    孕 曰













    Vloo 10l l酽103∥cloo 10l l酽l矿16.气I ,101 I旷世如

    CDl6/32

    图4 M1和M2巨噬细胞膜分子的表达 1.未刺激组;2.IFN一7+LPS;3.IL-4(’P<0.05、~P<0.01)

    3讨论
    巨噬细胞是一种极具异质性的细胞群体,在体 内复杂的微环境中,表现出独特的表型和功 能『-k 3’12]。Mantovani等[1 2]认为巨噬细胞存在一系 列连续的功能状态,而M1型和M2型巨噬细胞是 这_连续状态两个极端。M1型巨噬细胞通过分泌 促炎性细胞因子和趋化因子,并专职提呈抗原,参 与正向免疫应答,发挥免疫监视的功能;M2型巨 噬细胞仅有较弱抗原提呈能力,并通过分泌抑制性 细胞因子II。一10和/或TGF—B等下调免疫应答,在 免疫调节中发挥重要作用『1引。通过表型鉴定巨噬 细胞的类型,在研究巨噬细胞在不同生理和病理条 件下所发挥的功能具有重要的意义[1引。然而,至 今仍没有公认的表型标志来鉴定和区分不同类型的 巨噬细胞,M1型和M2型巨噬细胞的表型特征尚 无定论。因此,我们在体外按照常规方法诱导了 M1和M2型巨噬细胞,分别对已报道的多个表型 指标进行了检测,相对量化后比较分析发现:M1 型巨噬细胞iNOS表达和酶活性水平较未刺激与 M2型巨噬细胞均明显升高,IL-12产生显著增

    加,CDl6/32显示了高表达;M2型巨噬细胞Arg- l的表达水平和酶活性较未刺激和M1型巨噬细胞 显著提高,IL-IO分泌只轻度增加,并且表达高水 平的CD206和DECTIN一1,而MGL的表达没有明 显变化。比较分析结果表明:IL_12的分泌、iNOS 表达和活性以及膜蛋白CDl6/32的表达可用于鉴 定M1型巨噬细胞;而Arg一1表达和活性、CD206 以及DECTIN一1的表达,足鉴定M2型巨噬细胞较 为理想的表型指标。
    正常情况下,iNOS与Arg_1的表达和活性在 巨噬细胞中受到严格调控,两者的动态平衡在维持 巨噬细胞的功能稳定中发挥重要作用。Rauh等[5] 发现SHIP(Src homology 2一containing inositol-5,- phosphatase)缺陷小鼠巨噬细胞Arg-1的表达显著 增加,并且证实该模型中具有高Arg一1活性的M2 型巨噬细胞可导致小鼠发生肺实变和纤维化以及结 晶形成,介导了肺损伤,同时这种巨噬细胞NO产 生受损,从而不能有效地抑制肿瘤生长。而Her- bert等叩3利用巨噬细胞/中性粒细胞特异性IL一4受 体缺陷小鼠(LysM‰IL一4Ra叫““)证实M2型巨噬 细胞通过下调Thl反应和免疫炎症在血吸虫感染

     万方数据

    《现代免疫学}2008年第28卷第3期

    模型中起?;ぷ饔?,因为LysM∞IL-4Ra叫10‘小鼠 体内巨噬细胞无法接受Th2细胞因子(IL~4和IL- 13)的刺激信号,使M2型巨噬细胞产生障碍,表 现为iNOS高表达和Arg一1低活性,介导肝脏和肠 道的免疫病理损伤。Anthony等[15]在线虫感染模 型中也证实记忆性Th2细胞可诱导M2型巨噬细 胞发挥清除病原体的作用,是免疫记忆反应重要的 效应细胞,而这种?;ばвτ耄粒颍缫唬钡幕钚杂泄?。 因此,iN0s与Arg一1不仅可以用于鉴定M1型和 M2型巨噬细胞,同时也是重要的功能表型。IL-10 高表达和II。一12产生减少被认为是广义的M2型巨 噬细胞共同的表型标志,此表型与M2型巨噬细胞 的免疫调节功能有关。Weber等r161发现glatiramer acetate可诱导单核细胞高分泌IL一10,而IL-12的 产生减少,证实这种具有M2表型的单核细胞可通 过诱导调节性T细胞减轻EAE的发病,Denning 等[1 71发现肠道黏膜固有层巨噬细胞抑制性细胞因 子IL-10等表达明显上调,也可诱导调节性T细胞 维持局部免疫自稳。我们的实验结果显示IL一4刺 激巨噬细胞后IL-10分泌只有轻度增加,并且与 M1型巨噬细胞无显著性差异,这可能与不同疾病 模型中诱导M2的因素不同有关,IL—lO对于Th2 性细胞因子诱导的M2模型中并不是有意义的表型 指标。我们还鉴定出不同类型巨噬细胞的表面标 志,这在已有文献中已有报道,Stratis等u81以 cDl6/32为衷型证实牛皮癣模型中皮肤局部M1型 巨噬细胞的存在,可能与局部炎症有关;Luo 等f1鲴和Anthony等n朝将CD206作为小鼠M2型巨 噬细胞的表型标志,最近Tiemessen等[2叩还发现 CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞可使人类巨噬 细胞CD206等表面分子上调表达;Odegaard等Ll叫 和Vats等[1门以DECTIN—l作为M2型巨噬细胞的 膜分子表型,发现了氧化代谢和过氧化物酶体增殖 体活化受体一7(PPAR一7,peroxisome proliferator- activated receptor一-/)在调控M2型巨噬细胞产生过 程中起关键作用。然而,与Biswas等『9】的报道不 同,我们的体外模型并未检测到MGL表达的明显 变化,推测MGL可能是肿瘤局部微环境赋予肿瘤 相关巨噬细胞(tumor associated macrophages, TAM)特有的表型。
    本研究在体外诱导实验数据基础上,采用比较 分析的方法,评价了各种鉴定巨噬细胞类型的表型 指标,并从精氨酸代谢途径、细胞囚子和表面标志

    三个方面提出了有意义的表型鉴定指标,对巨噬细 胞的异质性研究具有重要的实验指导意义,同时为 淋巴细胞亚群的表型鉴定方法提供了新的思路,具 有一定的理论指导意义。 参考文献
    I二J ] 心] 口] I=l ] 口] 叩]
    口]
    眵] 凹]
    |=l 0
    口1 I=} 2 l=I 3
    I=l 4
    I二J 5

     万方数据

    M1和M2型巨噬细胞表型的比较分析

    [163 [17] [183

    cells induce alternatively activated macrophages to mediate protection against nematode parasites口].Nat Med,2006, 12:955-960. Weber MS,Prod’homme T.Youssef S,et a1.Type 11 monocytes modulate T cell—mediated central nervous system autoimmune disease[J].Nat Med,2007,13:935—943. Denning TL,Wang YC.Patel SR,et a1.Lamina propria macrophages and dendritic cells differentially induce regula— tory and interleukin 1 7-producing T cell responses.Nat Im— munol,2007,8:1086—1094. Stratis A,Pasparakis M,Rupee RA,et a1.Pathogenic role

    ·183·
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    Comparative analysis of phenotypes of classically(M1)and alternatively (M2)activated macrophages
    LI Kang,GUO Qiang,WANG Cui—ni,CHEN Min,XU Wei8,XIONG Si—dong(Institute for Immu— nobiology&Department of Immunology,Shanghai Medical College,Fudan University,Shanghai
    200032,China)
    Abstract:To well identify and evaluate the phenotypic characteristics of M1 and M2 macrophages by quantitative comparative analysis,bone marrow derived macrophages were stimulated with murine IFN一7 plus LPS or IL-4 for induction of M1 and M2 macrophages respectively.The expression of inducible nitric oxide synthase(iNOS)and arginase 1(Arg-1)was measured by RT—PCR.The iNOS and Arg一1 activity was analyzed by Griess assay and arginase assay,respectively.IL-12 and IL-10 levels were quantified by EI。ISA assay.Surface markers were determined by FACS analysis.It showed that IFN一7 plus LPS remark— ably induced NO release and iNOS mRNA expression in macrophages,which also produced higher abundances of IL-12 eom— pared to untreated macrophages.CDl6/32 expression was upregulated about 5-fold in the presence of IFN+7 and LPS.After stimulation with II。一4,macrophages showed high levels of Arg-1 expression and enzyme activity.FACS analysis revealed high expression of CD206 and DECTIN一1 on M2 macrophages.Comparative analysis indicated that phenotypes including iNOS,IL- 12 and CDl6/32 could be well used for identification of M1 macrophages,whereas Arg一1,CD206 and DECTIN一1 for identifi— cation of M2 macrophages. Key words:M1 macrophages;M2 macrophages phenotypic analysis

     万方数据


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